La Conferenza Stato-città ed autonomie locali è presieduta dal Presidente del Consiglio dei Ministri o, per sua delega, dal Ministro dell'interno o dal Ministro per gli affari regionali e le autonomie nelle materie di rispettiva competenza (art. 8, d.lgs. n. 281/1997).

Gli altri componenti per il Governo sono:
- il Ministro dell'economia e delle finanze;
- il Ministro delle infrastrutture e della mobilità sostenibili;
- il Ministro della salute.

I componenti per le Autonomie locali sono:
- il Presidente dell'Associazione Nazionale dei Comuni d'Italia - ANCI;
- il Presidente dell'Unione Province d'Italia - UPI;
- quattordici sindaci designati dall'ANCI, di cui cinque rappresentanti di Città metropolitane;
- sei presidenti di Provincia designati dall'UPI.

Alle riunioni della Conferenza possono essere invitati altri membri del Governo, nonché rappresentanti di Amministrazioni statali, locali o di Enti pubblici.

Le funzioni di Segretario della Conferenza Stato-città ed autonomie locali sono assolte dal Direttore dell'Ufficio di Segreteria. L'attuale Segretario della Conferenza è Marcella Castronovo.

Componenti della Conferenza Stato-città ed autonomie locali

Presidente della Conferenza
- Ministro dell’Interno - Luciana Lamorgese
- Ministro per gli affari regionali e le autonomie - Mariastella Gelmini
   (nelle materie di propria competenza)

Per il Governo:
- Ministro dell'economia e finanze - Daniele Franco
- Ministro infrastrutture e mobilità sostenibile - Enrico Giovannini
- Ministro della salute - Roberto Speranza

Per le Autonomie locali:
- Presidente dell'ANCI - Sindaco di Bari - Antonio Decaro
- Presidente dell'UPI - Pres. Provincia di Ravenna - Michele De Pascale

Sindaci designati dall'ANCI:
- Sindaco di Valdengo (BI) - Roberto Pella (vicepresidente vicario dell'ANCI)
- Sindaco di Roma Capitale - Roberto Gualtieri
- Sindaco di Cagliari - Paolo Truzzu
- Sindaco di Firenze - Dario Nardella
- Sindaco di Novara - Alessandro Canelli
- Sindaco di Pesaro - Matteo Ricci
- Sindaco di Potenza - Mario Guarente

Presidenti di Provincia designati dall'UPI:
- Presidente della Provincia di Arezzo - Silvia Chiassai
- Presidente della Provincia di Frosinone - Antonio Pompeo
- Presidente della Provincia di Lucca - Luca Menesini
- Presidente della Provincia di Matera - Pietro Marrese
- Presidente della Provincia di Treviso - Stefano Marcon
- Presidente della Provincia dell'Aquila - Angelo Caruso